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            ibidi通道載玻片中貼壁細胞的消化傳代

            更新時間:2022-08-09   更新時間:2022-08-09   點擊次數(shù):1225次

              在本應(yīng)用示例中,我們展示了如何從μ-Slide VI 0.4通道載玻片中洗脫培養(yǎng)后的貼壁細胞。該方法適用于不同規(guī)格的通道載玻片。

              

              1.根據(jù)實驗說明將您的細胞培養(yǎng)到所需的匯合度。  

              

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              裝有細胞和培養(yǎng)基的μ-Slide VI 0.4

              

              2.從μ-Slide VI 0.4通道載玻片的通道口中取出培養(yǎng)基,不要吸干整個通道。  

              

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              3.用PBS或任何其他適當(dāng)?shù)木彌_液清洗兩次,然后從另一端吸出。每個通道使用體積為100μl。我們建議同時使用細胞培養(yǎng)吸引器和移液器。如圖所示,使用吸引器的尖尖位置和移液器(如圖)。  

              

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              µ-Slide VI 0.4的一個通道的橫截面顯示了PBS洗滌步驟

              

              4.使用細胞培養(yǎng)吸液器從通道中吸出全部PBS,在這個步驟中,緩沖液從容器口和通道中*去除

              

              5.立即用30μl分離溶液(例如胰蛋白酶/EDTA或Accutase)重新填充通道。如圖所示,將移液器吸頭直接放在通道的入口上。將30µl分離溶液填充到空通道中。

              

              6.再將您的細胞放入培養(yǎng)箱中。由于生長面積和體積的縱橫比不同,分離過程可能需要比平時更長的時間(2-3分鐘)。用相差顯微鏡觀察細胞脫離。如果沒有發(fā)生分離,請增加分離溶液的濃度或使用更長的孵育時間。細胞會在幾分鐘后分離。

              

              7.細胞成圓形并分離后,用100μl新鮮培養(yǎng)基或終止溶液沖洗每個通道。分離的細胞被100µl新鮮培養(yǎng)基沖出通道。

              

              8.從通道的另一端取出細胞懸液。如果還剩一些細胞,請重復(fù)沖洗步驟。

              

              9.收集懸浮細胞并去除或稀釋分離溶液  

              

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              在細胞懸浮后,可以通過從通道中吸出溶液來收集

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